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质粒提取的问题:我是制感受态细胞转化之后再提取...

先一步步找原因。是实验步聚问题,还是试剂盒的问题, 如果是试剂盒的问题,推荐您用鼎国生物的。 价格应该还实惠点。

构建完的质粒是想表达还是提质粒保存~表达蛋白的应转化BL21等表达型菌株~提质粒应转化DH5a~然后提质粒-20度冻存~转化的感受态细胞可以保存菌株~但也不能长期保存质粒~

不对,通过转化到感受态细菌中,不是细胞.感受态的大肠杆菌,可以自己制作也可以通过购买.之后将细菌凃到含有抗生素的板子上,长出克隆后挑取单克隆,将单克隆加入含有抗生素的细菌培养基中培养,之后提取质粒,提取质粒可以购买相应的试剂盒,按照试剂...

对,它不表达自身质粒,因为培养基里有抗生素,只有携带抗生素基因的质粒(也就是我们转化到感受态里的质粒)才能表达,所以长出来的全都是含抗生素基因质粒的菌。所以提取出来的质粒肯定全都是我们转入要克隆的重组质粒。

这个问题可以从几外方面着用排查,一个,氨苄是否失效?失一个厂家的或者批次的试一下。 细菌是否产生抗性?我不加质粒,直接用感受态涂板,看是否能长出来。 质粒提取是否出问题了?挑起菌落,去摇菌,而不是用菌落去提质粒。 最后,你是如何知...

没有。

小时不听劝,长大做实验! 小时不听话,长大做转化! 小时爱打架,长大 P C R! 小时爱耍酷,长大建文库! 小时不辛苦,长大杀老鼠! 小时不努力,长大提质粒! 小时爱偷懒,长大涂平板! 小时不学好,长大养细胞! 小时瞌睡虫,长大做克隆! 开个...

跑出的条带胶回收后酶切?不应该没有条带~酶切不成功也应该有完整的质粒条带~你质粒的条带是否正确~正常应该有三条带~超螺旋最下面最亮~还有开环和线性~

可有数个拷贝的质粒进入同一细胞。但由于质粒不相容性,有些质粒会消失 用的哪种方法,电转化还是化学转化? 这个可能性很多,质粒质量,感受态细胞质量甚至质粒提取的试剂盒质量都有影响

可要,可不要。 感受态细胞:主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大,直观的说,使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性,这种孔洞会被细胞自身所修复。

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